Рибосомы – это макромолекулярные машины конвейерного типа, обеспечивающие процесс биосинтеза белка на матричной РНК. Их обычно рассматривают как однородные структуры с постоянным молекулярным составом, не обладающие регуляторной функцией. Однако их способность взаимодействовать со множеством белков, участвующих в трансляции, допускает существование специализированных рибосом, предназначенных для биосинтеза определённых белков. К примеру, в митохондриях дрожжей, чей геном кодирует всего восемь полипептидов, белок-специфическая трансляция реализована при помощи трансляционных активаторов – группы белков, каждый из которых регулирует трансляцию отдельной мРНК, не являясь при этом рибосомным белком. Несмотря на это, вопрос существования «мРНК-специфических» рибосом различного белкового состава остаётся неизученным. В данной работе представлен исследовательский подход к поиску различных популяций рибосом в митохондриях дрожжей. К митохондриальным рибосомным белкам были добавлены аффинные тяги, после чего был проанализирован белковый и РНК-состав рибосом, очищенных методом коиммунопреципитации. Показано, что митохондриальные рибосомы, выделенные из штаммов дрожжей с аффинными тягами на разных рибосомных белках, различаются по набору белковых компонентов. Детектированные различия являются скорее количественными, чем качественными: в каждом образце был выявлен почти полный набор митохондриальных рибосомных белков, но в разном количественном содержании (от 10 до менее чем 0,05 молекул на рибосому). Кроме того, исследован потенциал трансляционных активаторов как «крючка для ловли» рибосом, транслирующих определённые мРНК в митохондриях дрожжей.
Митохондриальная трансляция – это высокоспециализированный процесс биосинтеза закодированных в митохондриальном геноме белков, в основном – компонентов системы окислительного фосфорилирования, включающий четыре ключевые стадии: инициацию, элонгацию, терминацию и рециклинг митохондриальных рибосом. Каждая из этих стадий регулируется специфическим набором факторов трансляции, большинство из которых кодируются ядерным геномом и импортируются в митохондрии. Терминация митохондриальной трансляции у осуществляется при участии ядерно-кодируемого фактора высвобождения MRF1, который критически важен для обеспечения точности синтеза белков внутри органеллы. Данный фактор осуществляет распознавание стоп-кодонов и катализирует высвобождение завершённой полипептидной цепи из рибосомы. Помимо своей основной функции, MRF1 также принимает участие в процессах, связанных с поддержанием стабильности митохондриального генома. Целью настоящего исследования являлась оценка способности человеческих гомологов – hMTRF1, hMTRF1A, а также факторов спасения миторибосом hMTRFR и hMRPL58 – компенсировать отсутствие дрожжевого митохондриального фактора терминации трансляции MRF1 в клетках . Полученные результаты свидетельствуют о том, что человеческие ортологи дрожжевого MRF1 (hMTRF1 и hMTRF1A) способны участвовать в поддержании целостности митохондриального генома дрожжей, однако не обеспечивают полноценной функциональной замены MRF1, в частности, не восстанавливают способность к дыханию у мутантных штаммов дрожжей.
Indexing
Scopus
Crossref
Higher Attestation Commission
At the Ministry of Education and Science of the Russian Federation