By this author

DESIGNING A THERMOSTABLE MINI-INTEIN FOR INTEIN-MEDIATED PURIFICATION OF RECOMBINANT PROTEINS AND PEPTIDES

Issue number 6 from 04.02.2026

Данное исследование посвящено разработке термостабильных и термоактивируемых мини-интеинов на основе полноразмерного интеина DnaE1 из Thermus thermophilus HB27. В результате проведённого рационального дизайна на основе полноразмерного интеина путём внесения делеций были сконструированы мини-интеины TthDnaE1 Δ272, Δ280 и Δ287. Высокую эффективность сплайсинга наблюдали для TthDnaE1 Δ272 и Δ280 при температурах выше 50 °С. Наиболее активный мини-интеин с делецией Δ280 выбрали в качестве основы для создания самоотщепляющегося носителя аффинных меток путём точечного мутагенеза. Осуществлены мутации C1A, D405G и C1A/D405G, направленные на устранение возможности отщепления N-концевого экстеина и лигирования экстеинов. В результате максимальную эффективность отщепления C-экстеина наблюдали при температуре 60 °С у мини-интеина Δ280 с двойной мутацией C1A/D405G. Таким образом, нами были сконструированы термостабильные и термоактивируемые мини-интеины, способные к эффективному белковому сплайсингу или отщеплению C-концевого экстеина. Созданный мини-интеин TthDnaE1 Δ280 С1A/D405G может служить основой для разработки новой экспрессионной системы, предназначенной для интеин-опосредован-ного получения рекомбинантных белков и пептидов медицинского назначения.

80 0