By this author

COMPARISON OF METHODS FOR ASSESSING THE CONCENTRATION OF EXTRACELLULAR VESICLES ISOLATED FROM DIFFERENT BIOLOGICAL FLUIDS

Issue number 10 from 01.10.2025

Одним из ключевых этапов в исследовании внеклеточных везикул (ВВ), включая экзосомы и микровезикулы, является количественная оценка изолированных частиц. Несмотря на наличие различных подходов, ни один из них не даёт однозначного решения данной задачи, особенно при работе с биологическими жидкостями организма, обогащёнными наночастицами невезикулярного происхождения. Более того, для ряда источников ВВ, таких как маточные аспираты и желудочный сок, количественного анализа везикул практически не проводилось. Цель исследования заключалась в проведении сравнения трёх методов количественного анализа ВВ – оценки концентрации белка в препаратах ВВ, анализа траекторий движения наночастиц (NTA) и анализа эстеразной активности с помощью коммерческого набора для подсчёта экзосом FluoroCet – в образцах ВВ, выделенных из различных биологических жидкостей: плазмы крови, асцитической жидкости, маточных аспиратов, желудочного сока (ЖС) и кондиционированной среды (КС) клеточных линий рака яичника и немелкоклеточного рака лёгкого. Результаты показали, что для ВВ, выделенных из КС опухолевых клеток, все методы продемонстрировали высокую корреляцию, что свидетельствует о валидности применения каждого из методов для определения концентрации ВВ, полученных при высоком уровне чистоты образцов. В образцах плазмы крови, асцитической жидкости и маточных аспиратов зафиксированы расхождения между методами, обусловленные присутствием невезикулярных наночастиц. В отличие от ВВ из других жидкостей организма, в образцах ВВ ЖС обнаружена выраженная корреляция между содержанием белка и активностью ацетилхолинестеразы, что указывает на минимальную контаминацию образцов ВВ ЖС невезикулярными белковыми частицами и потенциально уникальный состав ВВ этой среды. Результаты подчёркивают необходимость многофакторной оценки количества ВВ с учётом источника образца. Полученные данные могут стать основой для разработки стандартизированных протоколов количественного анализа ВВ, что особенно актуально при работе с клиническими образцами.

8 0